Varför positiva Gramfärgning färga lila eller blå?

Varför positiva Gramfärgning färga lila eller blå?

Det enkla färgning förfarandet gör att visualisera bakterierna helt klart, men det skiljer inte mellan organismer av liknande morfologi. Gram färgning metod är uppkallad efter den danska bakteriologen (1882) Hans Christian Gram, är en av de viktigaste färgning teknikerna i mikrobiologi. Det är nästan alltid det första provet för identifiering av bakterier. Den primära fläcken av Gram's metod är kristallviolett. Kristallviolett ersätts ibland med metylenblått, som är lika effektiva. De mikroorganismer som behåller kristallviolett-jod komplexet visas lila brunt under mikroskopisk undersökning. Dessa mikroorganismer som färgas av metoden Gram's klassificeras vanligen som grampositiva eller Gram negativ. Andra som inte färgas av kristallviolett kallas gramnegativa och visas med röd färg. I denna metod fast bakteriell utstryket underkastas följande färgning reagenser i sekvens som anges nedan primära fläcken kristallviolett används först och fläckar alla cell lila träbets gram jod fungerar som en Bets, ett ämne som ökar cell affinitet för en fläck. Det gör detta genom att binda till primära fläcken och utgör därmed ett olösliga komplex. Den resulterande kristallviolett jod komplexa tjänar till att identifiera färgen på fläcken. På denna punkt visas alla celler lila svart. Decolorizing agent Gramfärgning är baserad på bakterier cellväggen förmåga att behålla kristallviolett färg under lösningsmedel behandling. Cellväggarna för grampositiva mikroorganismer har högre peptidoglykan och lägre fetthalten än Gramnegativa bakterier i gramnegativa cellerna, efterföljande behandling med ett decolorizer, (95% etanol) upplöser lipid lagret från gramnegativa cellerna. Avlägsnande av lipid lagret förbättrar urlakning av primära fläcken från cellerna i det omgivande lösningsmedlet. Däremot lösningsmedlet torkar tjockare grampositiva cellväggarna, stänga porerna som cellväggen krymper vid uttorkning. Som ett resultat av violet-jod komplexet diffusion blockeras och bakterierna förblir färgade. Räknaren fläcken En motfärg grundläggande fuchsin eller saffranin tillämpas på utstryket att ge decolorized Gramnegativa bakterier en rosa färg. Eftersom endast gramnegativa cellerna genomgår avfärgning kan de nu absorbera counter fläcken. Grampositiva cell behålla den lila färgen primära fläcken. Grundläggande fuchsin fläckar många Gramnegativa bakterier mer intensivt än gör safranin, vilket gör dem lättare att se. Vissa bakterier som färgas dåligt av safranin, som Haemophilus spp., Legionella spp. och vissa anaeroba bakterier, färgas lätt av grundläggande fuchsin, men inte safranin. Polykromatiska arten av Gramfärgning möjliggör bestämning av storleken och formen på både gramnegativa och grampositiva bakterier. Om så önskas, kan bilderna permanent monteras och bevaras för registerhållning.